口腔科学论文_外泌体诱导3D纳米纤维小管中牙髓
文章目录
1 材料与方法
1.1 主要材料与仪器
1.2 方法
1.2.1 DPSCs原代培养与鉴定
1.2.2 SCAP-Exo的提取与鉴定
1.2.3 3D纳米纤维小管的材料合成与构建
1.2.4 DPSCs黏附实验
1.2.5 DPSCs增殖检测
1.2.6 ALP活性检测
1.2.7 实时RT-PCR检测与Western Blot检测
1.3 统计学处理
2 结果
2.1 DPSCs的培养与鉴定
2.2 SCAP-Exo的鉴定
2.3 3D纳米纤维小管支架的构建与DPSCs黏附情况分析
2.4 DPSCs增殖检测结果
2.5 ALP活性检测结果
2.6 SCAP-Exo对3D纳米纤维小管中DPSCs成骨/成牙本质向分化的影响
3 讨论
文章摘要:目的探究基质细胞衍生因子-1α（stromal cell-derived factor-1α,SDF-1α）诱导的根尖牙乳头干细胞来源外泌体（exosomes derived from stem cells from apical papilla,SCAP-Exo）对3D纳米纤维小管中牙髓干细胞（dental pulp stem cells,DPSCs）增殖和成骨/成牙本质向分化的影响。方法提取SDF-1α诱导的SCAP-Exo,采用透射电镜、纳米粒子跟踪技术及Western Blot进行鉴定。将DPSCs培养于3D纳米纤维小管中,扫描电镜观察DPSCs的形态与黏附状态。使用不同质量浓度（0、50、100μg/mL）的SCAP-Exo刺激3D纳米纤维小管中的DPSCs,分别记为对照组、50μg/mL SCAP-Exo组和100μg/mL SCAP-Exo组,并对细胞增殖活力和碱性磷酸酶（ALP）活性进行检测;实时RT-PCR和Western Blot分别检测成骨/成牙本质向分化相关基因的mRNA和蛋白表达水平。结果 SCAP-Exo形态呈茶托状,具有双层膜结构,平均粒径为126.4 nm,能够表达外泌体标志蛋白CD9和CD81。扫描电镜观察显示DPSCs在3D纳米纤维小管中的黏附状态良好。50μg/mL SCAP-Exo组和100μg/mL SCAP-Exo组DSPCs的增殖活力和ALP活性均高于对照组,且100μg/mL SCAP-Exo组较50μg/mL SCAP-Exo组的ALP活性升高更显著（均P <0.05）。100μg/mL SCAP-Exo组成骨/成牙本质向分化基因（ALP、DMP-1、BSP和OCN）的mRNA和蛋白表达水平均高于对照组（均P <0.05）。结论 DPSCs可在3D纳米纤维小管中维持良好的增殖活力。SDF-1α诱导的SCAP-Exo可增强3D纳米纤维小管中DPSCs的增殖活力和ALP活性,以及促进其向成骨/成牙本质向分化。
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